發(fā)布日期：2025/03/19

實(shí)驗(yàn)室中常用的緩沖溶液在維持反應(yīng)體系的pH穩(wěn)定性方面起著關(guān)鍵作用，以下是一些常見(jiàn)的緩沖液及其特點(diǎn)和應(yīng)用：

 

      1. 磷酸鹽緩沖液（PBS、DPBS等）    

    組成：主要由磷酸二氫鈉（NaH?PO?）和磷酸氫二鈉（Na?HPO?）組成，部分含氯化鈉（如PBS）或鈣、鎂離子（如DPBS）。  

    pH范圍：6.2~8.2，常見(jiàn)pH 7.4。  

    應(yīng)用：  

      PBS：用于細(xì)胞洗滌、免疫檢測(cè)（如ELISA、流式細(xì)胞術(shù)）、組織運(yùn)輸?shù)?，因其等滲無(wú)毒特性。  

      DPBS：含Ca²?和Mg²?，適用于細(xì)胞培養(yǎng)、免疫染色等需要離子支持的場(chǎng)景。  

    注意事項(xiàng)：磷酸鹽可能與金屬離子形成沉淀，高溫滅菌可能影響pH穩(wěn)定性。

 

      2. Tris緩沖液（Tris HCl）    

    組成：三羥甲基氨基甲烷（Tris）與鹽酸（HCl）調(diào)節(jié)pH。  

    pH范圍：7.0~9.0，常用pH 8.0~8.6。  

    應(yīng)用：  

      核酸實(shí)驗(yàn)：DNA/RNA提取、SDS PAGE電泳、堿性磷酸酶活性測(cè)定。  

      蛋白質(zhì)純化：維持中性至弱堿性環(huán)境，避免與金屬離子反應(yīng)。  

    注意事項(xiàng)：溫度敏感（pH隨溫度變化明顯），需現(xiàn)用現(xiàn)配。

 

      3. HEPES緩沖液    

    組成：4 羥乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）與NaOH調(diào)節(jié)pH。  

    pH范圍：6.8~8.2，尤其適合細(xì)胞培養(yǎng)（pH 7.2~7.4）。  

    應(yīng)用：  

      細(xì)胞培養(yǎng)：在無(wú)CO?環(huán)境中穩(wěn)定pH，如活細(xì)胞成像、免疫沉淀。  

      生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)：電鏡觀察、抗原 抗體反應(yīng)等。  

    優(yōu)勢(shì)：對(duì)細(xì)胞無(wú)毒，不干擾代謝過(guò)程。

 

      4. 醋酸緩沖液    

    組成：醋酸（CH?COOH）與醋酸鈉（CH?COONa）。  

    pH范圍：3.7~5.6，常用pH 4.0~5.0。  

    應(yīng)用：  

      核酸純化：DNA/RNA沉淀（乙醇 醋酸鈉法）。  

      電泳染色：蛋白質(zhì)結(jié)晶和凝膠染色。  

    特點(diǎn)：成本低、配制簡(jiǎn)單，但緩沖能力較弱。

 

      5. 檸檬酸鹽緩沖液    

    組成：檸檬酸（C?H?O?）與檸檬酸鈉（Na?C?H?O?）。  

    pH范圍：3.0~6.2，常用pH 4.7。  

    應(yīng)用：  

      抗原修復(fù)：用于石蠟包埋組織切片的抗原解離。  

      RNA分離：破壞RNase活性，保持RNA完整性。  

 

      6. 碳酸鹽 碳酸氫鹽緩沖液    

    組成：碳酸鈉（Na?CO?）與碳酸氫鈉（NaHCO?）。  

    pH范圍：9.2~10.6，常用pH 10.0。  

    應(yīng)用：  

      ELISA實(shí)驗(yàn)：包被抗體或抗原（如夾心法ELISA）。  

      酶偶聯(lián)反應(yīng)：在堿性條件下穩(wěn)定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。  

 

      7. TAE/TBE緩沖液（核酸電泳專用）    

    組成：  

      TAE：Tris 乙酸 EDTA。  

      TBE：Tris 硼酸 EDTA。  

    pH范圍：8.0~8.5。  

    應(yīng)用：  

      瓊脂糖電泳：TAE適用于大片段DNA分離，TBE適合小片段和高分辨率實(shí)驗(yàn)。  

    注意事項(xiàng)：TAE緩沖能力較弱，需及時(shí)更換。

 

      其他常見(jiàn)緩沖液    

    硼酸鹽緩沖液  （pH 8.0~10.8）：用于眼藥水配制或藥物釋放介質(zhì)。  

    MES緩沖液  （pH 5.5~6.7）：適用于酶活性測(cè)定和低pH細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。