發(fā)布日期:2025/03/19
實(shí)驗(yàn)室中常用的緩沖溶液在維持反應(yīng)體系的pH穩(wěn)定性方面起著關(guān)鍵作用,以下是一些常見(jiàn)的緩沖液及其特點(diǎn)和應(yīng)用:
1. 磷酸鹽緩沖液(PBS、DPBS等)
組成:主要由磷酸二氫鈉(NaH?PO?)和磷酸氫二鈉(Na?HPO?)組成,部分含氯化鈉(如PBS)或鈣、鎂離子(如DPBS)。
pH范圍:6.2~8.2,常見(jiàn)pH 7.4。
應(yīng)用:
PBS:用于細(xì)胞洗滌、免疫檢測(cè)(如ELISA、流式細(xì)胞術(shù))、組織運(yùn)輸?shù)?,因其等滲無(wú)毒特性。
DPBS:含Ca²?和Mg²?,適用于細(xì)胞培養(yǎng)、免疫染色等需要離子支持的場(chǎng)景。
注意事項(xiàng):磷酸鹽可能與金屬離子形成沉淀,高溫滅菌可能影響pH穩(wěn)定性。
2. Tris緩沖液(Tris HCl)
組成:三羥甲基氨基甲烷(Tris)與鹽酸(HCl)調(diào)節(jié)pH。
pH范圍:7.0~9.0,常用pH 8.0~8.6。
應(yīng)用:
核酸實(shí)驗(yàn):DNA/RNA提取、SDS PAGE電泳、堿性磷酸酶活性測(cè)定。
蛋白質(zhì)純化:維持中性至弱堿性環(huán)境,避免與金屬離子反應(yīng)。
注意事項(xiàng):溫度敏感(pH隨溫度變化明顯),需現(xiàn)用現(xiàn)配。
3. HEPES緩沖液
組成:4 羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)與NaOH調(diào)節(jié)pH。
pH范圍:6.8~8.2,尤其適合細(xì)胞培養(yǎng)(pH 7.2~7.4)。
應(yīng)用:
細(xì)胞培養(yǎng):在無(wú)CO?環(huán)境中穩(wěn)定pH,如活細(xì)胞成像、免疫沉淀。
生物化學(xué)實(shí)驗(yàn):電鏡觀察、抗原 抗體反應(yīng)等。
優(yōu)勢(shì):對(duì)細(xì)胞無(wú)毒,不干擾代謝過(guò)程。
4. 醋酸緩沖液
組成:醋酸(CH?COOH)與醋酸鈉(CH?COONa)。
pH范圍:3.7~5.6,常用pH 4.0~5.0。
應(yīng)用:
核酸純化:DNA/RNA沉淀(乙醇 醋酸鈉法)。
電泳染色:蛋白質(zhì)結(jié)晶和凝膠染色。
特點(diǎn):成本低、配制簡(jiǎn)單,但緩沖能力較弱。
5. 檸檬酸鹽緩沖液
組成:檸檬酸(C?H?O?)與檸檬酸鈉(Na?C?H?O?)。
pH范圍:3.0~6.2,常用pH 4.7。
應(yīng)用:
抗原修復(fù):用于石蠟包埋組織切片的抗原解離。
RNA分離:破壞RNase活性,保持RNA完整性。
6. 碳酸鹽 碳酸氫鹽緩沖液
組成:碳酸鈉(Na?CO?)與碳酸氫鈉(NaHCO?)。
pH范圍:9.2~10.6,常用pH 10.0。
應(yīng)用:
ELISA實(shí)驗(yàn):包被抗體或抗原(如夾心法ELISA)。
酶偶聯(lián)反應(yīng):在堿性條件下穩(wěn)定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。
7. TAE/TBE緩沖液(核酸電泳專用)
組成:
TAE:Tris 乙酸 EDTA。
TBE:Tris 硼酸 EDTA。
pH范圍:8.0~8.5。
應(yīng)用:
瓊脂糖電泳:TAE適用于大片段DNA分離,TBE適合小片段和高分辨率實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng):TAE緩沖能力較弱,需及時(shí)更換。
其他常見(jiàn)緩沖液
硼酸鹽緩沖液 (pH 8.0~10.8):用于眼藥水配制或藥物釋放介質(zhì)。
MES緩沖液 (pH 5.5~6.7):適用于酶活性測(cè)定和低pH細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。
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